Često postavljana pitanja o centrifugalnim filtarskim uređajima
Q1. Potrebno je odvojiti proteine različitih molekularnih težina, pa kolika bi razlika trebala biti u molekularnim težinama proteina?
O: Veličina dvaju proteina mora se razlikovati 10 puta ili više.
Q2. Može centrifugiratiAluređaji za filtriranje budu sterilizirani i otporni na pranje s lužinama?
O: Može se sterilizirati 75-postotnom vodenom otopinom etanola, a membrana može izdržati 0.1-0.5N alkalno pranje natrijevim hidroksidom.
Q3. Kako postupiti ako se protein istaložio tijekom koncentracije?
O: Ako se protein koncentrira prebrzo ili previše koncentrirano, to može uzrokovati taloženje proteina, a konačna koncentracija proteina nakon koncentracije ne bi trebala biti previsoka; Proteini koji su osjetljivi na brzinu koncentracije i imaju tendenciju taloženja, predložena metoda poboljšanja:
Smanjite centrifugalnu brzinu
Koristite ultrafiltracijsku membranu s višom molekularnom težinom granične vrijednosti
Puhnite i usišite koncentriranu epruvetu, a zatim centrifugirajte
Q4. Koji je mogući razlog zašto jecentrifugalni filtarski uređajine može se centrifugirati prema dolje?
O: Možete koristiti oko 20 posto vodene otopine etanola za početno centrifugiranje ako se epruveta za ultrafiltraciju ne može centrifugirati, jer je membrana za ultrafiltraciju potpuno suha, površina membrane je slabo hidrofobna, a tok se može obnoviti nakon infiltracije s niskim površinski napon solvent.
Q5. Ispravni načini uporabe i skladištenja centrifugalnih filtarskih uređaja
O: Centrifugalne filtarske uređaje treba centrifugirati s pročišćenom vodom prije upotrebe kako bi se provjerio njihov integritet. Nakon svake uporabe potrebno ju je pohraniti u mokrom stanju kako se membrana ne bi osušila.
Q6. Kako uređaji za centrifugalni filter uklanjaju endotoksin?
O: Centrifugalni filtarski uređaji koje smo isporučili nisu bili tretirani endotoksinima, a budući da endotoksini postoje široko rasprostranjeni u prirodi, uzorci koji zahtijevaju endotoksine mogu se prethodno očistiti s 0.5N natrijevim hidroksidom prije eksperimenta, a zatim isprati s RO vodu za uklanjanje većine endotoksina.
Q7. Kada se koncentrirani protein koristi za nizvodnu analizu, ustanovi se da postoji smetnja, koji je razlog?
O: Centrifugalni filtarski uređaji mogu se prethodno oprati puferskom otopinom ili pročišćenom vodom. Ako smetnja još uvijek postoji, isperite 0.1N natrijevim hidroksidom, a zatim isperite pročišćenom vodom.
Q8. IUtvrđeno je da nema ciljnog proteina u koncentratu nakon koncentriranja. Koji su mogući razlozi?
O: 1) Početna koncentracija proteina ne smije biti preniska, ako je koncentracija preniska, membrana možda neće moći zadržati.
2) Odaberite odgovarajuću veličinu pora membrane. Centrifugalna koncentracija filtarske cijevi pripada slijepoj filtraciji, a veličina pora membrane općenito je manja od 2 puta ili više od ciljanog proteina.
3) Odaberite pravu centrifugalnu brzinu
4) Da li se ciljni protein taloži
Q9. Pasivna obrada centrifugalnih filtarskih uređaja
O: Predobrada površine centrifugalnih filtarskih uređaja pasivizacijom može smanjiti adsorpcijski gubitak proteina na površini membrane, u većini slučajeva, prethodna obrada kolone prije koncentriranja razrijeđene otopine proteina može poboljšati oporavak, jer otopina može ispuniti izloženu prazna mjesta adsorpcije proteina na membrani i površini, metoda pasivizacije je prethodno natapanje kolone s velikim volumenom otopine za pasivizaciju dulje od 1 sata, temeljito ispiranje kolone destiliranom vodom, a zatim jednom centrifugiranje kolone destiliranom vodom kako biste potpuno uklonili otopinu za pasiviranje koja bi mogla ostati na membrani, pazite da se membrana ne osuši nakon pasivacije, ako je želite zadržati za buduću upotrebu, morate dodati sterilnu destiliranu vodu kako bi membrana ostala vlažna., kontaktirajte naši inženjeri za uobičajena rješenja pasivizacije.
Q10. Filtrira li ultrafiltracijska membrana molekule hijerarhijski?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 posto ako koristite ultrafiltracijsku membranu od 100 kd, međutim, molekule manje od veličine pora membrane ne prolaze potpuno slobodno kroz membranu. Stopa molekularne retencije od 67 kd je više od 70 posto, a protein od 43 kd također je odrezan za više od 40 posto, različite komponente u miješanoj otopini prolaze kroz membranu nije tako jednostavno i lako kao jednokomponentna otopina, u praksi , ako želite izolirati dvije makromolekule, razlika u molekularnoj težini između njih trebala bi biti osam puta ili više.
Q11. Kako učinkovito odvojiti velike i male molekule ultrafiltracijom?
O: Zbog potreba procesa, nečistoće u makromolekulama se uklanjaju ili se male molekule uklanjaju iz makromolekula, to je normalno u proizvodnji. Vrlo je potrebno odabrati odgovarajuću veličinu pora membrane, metodu filtracije i radne uvjete. Općenito govoreći, ako je MWCO specifikacija membrane odabrana između dva proteina, može se postići relativno idealno odvajanje. Ako je otopina proteina relativno razrijeđena, rad pod niskim tlakom također će pomoći u postizanju boljih rezultata. Odaberite filtraciju tangencijalnog protoka i izvedite višestruku dijafiltraciju kako biste dobili bolji učinak odvajanja.
