Cjepivo protiv čestica nalik virusu i njegov postupak pročišćavanja nizvodno
Cjepivo protiv virusa (VLP) cjepivo je tehnologija cjepiva koja se temelji na strukturi virusa, ali ne sadrži virusne genetske materijale. Oni stimuliraju snažan imunološki odgovor oponašajući morfologiju i površinske antigene prirodnih virusa i pružaju veću sigurnost zbog njihove nemogućnosti repliciranja. VLP cjepiva bolja su alternativa tradicionalnim cjepivima (živa atenuirana i inaktivirana). VLP cjepivo ne može se ponoviti u tijelu, tako da je prikladno za sve, uključujući trudnice ili one s kompromitiranim imunološkim sustavima. Osim toga, kapsidni proteini (uključujući ostale strukturne proteine) iz virusa sa segmentiranim genomima, poput virusa gripe, virusa afričkih konjskih bolesti i virusa bluetongue, također se mogu koristiti za razvoj VLP cjepiva bez brige o genetskim problemima rekombiracije poput živih cjepiva. Drugo, VLP -ovi su u stanju oponašati strukturu stvarnih virusa, za razliku od inaktiviranih cjepiva, čiji se strukturni proteini mogu modificirati tijekom inaktivacije, što rezultira imunogenim oštećenjem.
Fi. 1. Mehanizam formiranja VLP -a i himernih VLP -ova
Značajke VLP cjepiva
1. Struktura slična prirodnim virusima: VLP-ovi se samostalno sastavljaju virusnim ili više strukturnih proteina (poput kapsidnih proteina), a njihova veličina i oblik slični su stvarnim virusima.
2. Neinfektivno: ne sadrži virusni genom, ne može ponoviti ili uzrokovati bolest.
3. Visoka imunogenost: Imunološki sustav može se prepoznati i imunološki sustav i aktivirati reakcije B stanica i T stanica. Može inducirati neutralizaciju antitijela i staničnog imuniteta (npr. HIV, HPV cjepiva).
4. Visoka sigurnost: pogodno za osobe s niskom imunološkom funkcijom (poput hepatitisa B VLP cjepiva).
Fi. 2. Dostupna VLP cjepiva
VLP sustav za proizvodnju cjepiva
VLP -ovi se mogu proizvesti putem različitih ekspresijskih sustava, uobičajene platforme uključuju:
1. Sustav insekata-bakulovirus:
Prednosti: visoki prinos, niski trošak, pogodan za složeno sastavljanje proteina.
Primjena: Cjepivo protiv HPV -a, cjepivo protiv ebole.
2. Stanice sisavaca (npr. Stanice HEK293):
Prednosti: Post-translacijske modifikacije bliže su ljudima i pogodne za omotane VLP-ove (poput cjepiva protiv gripe).
3. Sustavi kvasca (npr. Pichia Pastoris):
Prednosti: Brzi, niski troškovi korišteni su u cjepivu protiv hepatitisa B.
4. biljni sustavi (npr. Duhanski kloroplasti):
Ekološki prihvatljiva i skalabilna, u razvoju (npr. Cjepivo protiv norovirusa VLP).
Proces pročišćavanja VLP cjepiva nizvodno
Raznolikost ekspresijskih sustava VLP -a dovodi do nepopuštenosti procesa pročišćavanja nizvodno.
Fi. 3 Općenita shema toka procesa nizvodno
Berba i pojašnjenje:
U svim vrstama kulturnog medija, koji se propisuje staničnom kulturom, postoji veliki broj čestica virusa, kao i mnoge krhotine staničnog tkiva, metaboličkih proizvoda i drugih nečistoća, čineći kulturu srednje zamućenim ili polu-kvrgavim, ako koncentriraju kulturni medij izravno, ultrafiltracijska membrana će biti ispunjena, a ultra se ne može dovršiti. Stoga se prvo mora razjasniti prije koncentracije, kako bi se uklonile velike čestice u mediju za kulturu, tako da postane prozirna ili prozirna otopina, a koncentracija medija za kulturu može učiniti proces koncentracije normalnim i osigurati radni vijek membrane ultrafiltracije. Pojašnjenje prije koncentracije rješenja kulture ključna je tehnička veza u procesu koncentracije.
Učinkovit postupak pojašnjenja zahtijeva kombinaciju velikog kapaciteta za uklanjanje čvrstih čestica, visokog prinosa proizvoda, lako povećanja i zaštite na radne jedinice nizvodno.
Metoda
Centrifugiranje: Diferencijalno centrifugiranje uklanja velike čestice.
Duboka filtracija: Upotrijebite višestupanjski filter (npr. 1,2 μm → 0. 45 μm) da biste razjasnili supernatans.
Tangencijalna filtracija protoka (TFF): Prikladna za masovnu proizvodnju, koncentrira uzorke i uklanja male čestice nečistoća.
Međutim, ako je ljestvica uzgoja prevelika, centrifugiranje traje dugo, bit će potreban veliki broj dubokih filtriranih membrana, tako da se troškovi potrošnog materijala uvelike povećavaju. Istodobno, visoka gustoća stanične kulture smanjit će opterećenje duboke membrane filtra, što će rezultirati povećanim troškovima i prekomjernim razrjeđivanjem proizvoda.
Postoje dvije vrste komponenti membrane TFF -a: ravna kaseta i šuplja vlakna. Tangencijalna filtracija protoka (TFF) pokreće se transmembranskom razlikom tlaka. Tvari i nečistoće koje su manje od membrane prolaze kroz membranu, dok su nečistoće poput stanica s većim česticama zarobljene. Veličina pora membrane koja se koristi za mikrofiltraciju je {{0}}. 45/0,22 μm. Hollow Fiber može izravno obraditi visoku tekućinu u sadržaju krute čvrste, kao što je medij stanične kulture visoke gustoće, može eliminirati korake centrifugiranja i prije filtracije, manje koraka, jednostavne operacije, membrane, mogu se više puta koristiti čišćenjem, smanjenjem ulaganja u opremu i operativnim troškovima, u skladu sa zahtjevima modularne automatizirane proizvodnje.
Koncentracija ultrafiltracije (TFF):
Cilj: Da biste smanjili količinu kromatografskog liječenja, poboljšajte kromatografsku učinkovitost i zaštitite kromatografski stupac.
Općenito, ultrafiltracija (TFF) može koncentrirati više od 100 puta VLP -a, a brzina uklanjanja heteroproteina može doseći 99%. Među njima, tehnologija filtracije membrane šupljih vlakana ima prednosti blage i male sile smicanja, nije lako uključiti, fleksibilni rad, dugi život, nisko cijenu i lako pojačavanje, pa se preporučuje odabir šupljih vlakana za koncentrirani i pročišćeni VLP.
Kada se metoda ultrafiltracije koristi za koncentraciju i pročišćavanje, vrlo je važno odabrati veličinu pora desne membrane, što izravno određuje učinkovitost i kvalitetu koncentracije. S jedne strane, potrebno je odabrati otvor membrane kako biste učinkovito zarobili ciljne molekule kako bi se osigurao prinos, a s druge strane, efekt uklanjanja i brzina obrade heteroproteina treba u potpunosti uzeti u obzir. Stoga je najbolji princip odabir membrane s najvećom veličinom pora koja može zarobiti ciljanu molekulu i pokušati odabrati membranu filtra s ujednačenom raspodjelom veličine pora.
Primarno pročišćavanje:
1. Metoda oborina
Oborine polietilen glikola (PEG): Selektivna taloga VLP -a zahtijeva optimiziranu koncentraciju PEG -a i koncentraciju soli da bi se uravnotežila prinos i čistoća.
2. Kromatografija
Afinitetna kromatografija:
Afinitet heparina: Korištenje VLPS svojstava površinskog negativnog naboja (npr. HPV VLP).
Kromatografija za spajanje antitijela: visoka specifičnost, ali skupa.
Ionska kromatografija za razmjenu (IEX): Odaberite anionsku razmjenu (npr. Q stupac) ili kationsku razmjenu (npr. SP stupac), ovisno o karakteristikama površinskog naboja VLP -a i optimizirajte pH i gradijent soli kako biste izbjegli agregaciju čestica.
Hromatografija hidrofobne interakcije (HIC): Na temelju površinske hidrofobnosti VLP-a, pogodne za neke nesunšisane VLP-ove.
Fino pročišćavanje:
Molekularna kromatografija za isključenje (SEC, Filtracija gel):
Uklanjanje zaostalih proteina domaćina, nukleinskih kiselina ili agregata, praćeno zamjenom pufera. Visoka rezolucija, ali nizak tok, često se koristi kao konačni korak usavršavanja.
Multi-modna kromatografija:
Na primjer, smole serije Capto Core, u kombinaciji s ionskom razmjenom i molekularnim efektom sita, mogu ukloniti različite nečistoće u jednom koraku.
Inaktivacija virusa/uklanjanje nukleinske kiseline (ako je potrebno):
Tretmani nukleaza: kao što je benzonaza degradira DNA/RNA domaćina.
UF/DF: Koordinacija TFF sustava za uklanjanje malih fragmenata nukleinskih kiselina i enzima.
Koncentracija i priprema:
Tangencijalna filtracija protoka (TFF):
Koncentrirajte se na ciljane titre dok pomaknite pufere (poput PBS -a ili pufera za formulaciju).
Sterilna filtracija:
0. 22 μm membrana Filtracija osigurava sterilnost.
Tipičan slučaj
Slijede procesi pročišćavanja nizvodno za tipična VLP cjepiva.
O vodstvu
Tehnologija Guidling je poduzeće usmjereno na proizvodnju i visokotehnološko se usredotočeno na pojašnjenje, odvajanje i pročišćavanje biofarmaceutika. Proizvodi se široko koriste u procesu filtracije mAb, cjepiva, dijagnoze, krvnih proizvoda, seruma, endotoksina i drugih bioloških proizvoda; Tehnologija usmjeravanja ima "Cassettes filtriranje i tangencijalni uređaj za filtraciju protoka", "membrana šupljih vlakana", "virusni filter", "duboka membrana", "filter sterilizacijske", "uređaji za centrifugalni filter" i druge proizvode, te ima veliki broj linija proizvoda, iz malog katastrofalnog filtracije, u skladu s proizvodnom filtracijom. Tehnologija Guidling raduje se suradnji s vama!
