SP snažna kationska izmjenjivačka membranska kromatografija

Uvod u CM proizvode za kromatografiju slabe ion-izmjenjivačke membrane

 

1. Pregled

CM kromatografija slabe kationske-izmjene tehnologija je pročišćavanja u kojoj se karboksimetilne skupine vežu na membranu kako bi oblikovale funkcionalni modul. Razdvajanje se postiže na temelju razlika u svojstvima naboja i gustoći naboja različitih biomolekula. Budući da većina bioloških makromolekula sadrži karboksilne ili hidroksilne skupine, njihove karakteristike naboja i veličina mogu se prilagoditi promjenom pH vrijednosti puferske otopine. Nakon što se biomolekule vežu za membranski modul noseći suprotne naboje, elucija se izvodi promjenom ionske jakosti ili pH mobilne faze. Molekule sa slabijim afinitetom vezanja se prvo eluiraju, dok se one s jačim afinitetom vezanja eluiraju kasnije, čime se postiže učinkovito odvajanje.

 

2. Prednosti proizvoda

2.1 Brzo i učinkovito: Visok kapacitet vezivanja može se postići pri brzinama protoka do 40 puta bržim od konvencionalne kromatografije na bazi -smole. U usporedbi s tradicionalnom -kromatografijom u sloju, membranska kromatografija može skratiti vrijeme procesa za 30-40 puta. Tipična radna brzina protoka je 10 MV/min.

2.2 Visoka učinkovitost vezanja: Membranska kromatografija pokazuje veliki kapacitet punjenja i velike brzine protoka u uvjetima niskog pada tlaka, što omogućuje hvatanje nabijenih biomolekula u jednom prolazu kroz modul.

2.3 Skalabilan i fleksibilan: Kompletan asortiman proizvoda za membransku kromatografiju može zadovoljiti različite potrebe obrade biomakromolekula, pokrivajući faze od razvoja procesa do -velike proizvodnje. Dizajn kapsule omogućuje jednokratnu-namjenu ili se prema potrebi može očistiti i ponovno upotrijebiti.

2.4 Povećana produktivnost: Kompaktan dizajn minimalizira prostor koji zauzima prostor. Eliminacijom koraka pakiranja kolone, čišćenja, provjere valjanosti čišćenja i skladištenja kolone, obrada može započeti nakon uspostavljanja ravnoteže s relativno malim volumenom pufera. Bez potrebe za pakiranjem kolone, čišćenjem ili skladištenjem, troškovi rada mogu se smanjiti za više od 50%.

 

3 Tehnički parametri

3.1 Strukturni materijali

	Laboratorijska vaga	mala razmjera	Pilot skala	Razmjer proizvodnje
Volumen membrane	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Potporna struktura membrane	Polipropilen
Membransko kućište	Polipropilen
O prsten	Silikonska guma

3.2 Radne karakteristike

	Laboratorijska vaga	mala- ljestvica	Pilot- mjerilo	Razmjer proizvodnje
Volumen membrane	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Preporučeni protok	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maksimalna radna temperatura	35 stupnjeva
Maksimalni radni tlak	3 bara (25 stupnjeva)
Maksimalna razlika tlaka	3 bara (25 stupnjeva)
Uvjeti skladištenja	20% vodena otopina etanola

U usporedbi s konvencionalnim medijima, vijek trajanja CM membranske kromatografije usporediv je s vijekom trajanja CM agaroznog gela 6FF.

Slika 1. Promjene u kapacitetu punjenja CM membranske kromatografije nakon višestruke uporabe u ispitivanju lizozima.

Dodatno, procijenili smo učinkovitost uklanjanja proteina i nukleinskih kiselina stanica domaćina membranskom kromatografijom. Rezultati su prikazani u nastavku.

Tablica 1. Stope uklanjanja DNA i proteina stanica domaćina u CHO-eksprimiranom IgG materijalu pomoću CM membranske kromatografije

Niz eksperimenata pokazao je da CM membranska kromatografija može učinkovito ukloniti kontaminante uz održavanje visoke stope oporavka ciljnog IgG

	DNK				HCP
	IgG oporavak	Sadržaj (pg/mg IgG) pomoću RT PCR		Faktor uklanjanja	Sadržaj (ng/mg IgG) prema Elisi		Faktor uklanjanja
Trčanje	%	Prije Q membrane	Nakon Q membrane	Dnevnik	Prije Q membrane	Nakon Q membrane	Dnevnik
1	96.7	423	6.9	1.79	7	6.1	0.06
2	97.4	438	5.8	1.88	7	4.8	0.16
3	94.7	513	9.6	1.73	6	3.6	0.22
4	95	32	4.6	0.84	6	4.7	0.11
5	96.3	45	4.6	0.99	8	5.1	0.20
6	96.5	158	8.2	1.28	8	4.6	0.24
7	96.4	267	6.5	1.61	9	6.8	0.12
8	96.8	298	5	1.78	9	7.4	0.09
9	97.1	746	5.6	2.12	4	3.5	0.06
10	96.6	39	5	0.89	4	3.9	0.01

Korištenjem Gudiling CM membranske kromatografije u usporedbi s drugim markama, podaci o kapacitetu punjenja prikazani su u nastavku.

Kapacitet punjenja (mg/mL)	Jingbiao 1	vođenje
Lizozim	18	23
tripsin	17	20

Tablica 2. Učinak punjenja različitih proteina u našem proizvodu u usporedbi s proizvodima konkurencije

Ukupna procjena pokazuje da je naš kapacitet utovara usporediv s kapacitetom uvezenih proizvoda.

Slika 2. Ispitivanje kapaciteta punjenja CM membranskog kromatografskog modula korištenjem lizozima kao standardnog proteina.

Dinamička nosivost također je uspoređena s onom uvezenih proizvoda. Verifikacija je pokazala da se lizozim može eluirati pomoću 160 mM NaCl, što omogućuje učinkovito hvatanje većine ciljnih proteina.

Optimizacijom različitih uvjeta eluiranja, otkrili smo da membranska kromatografija pokazuje ponašanje eluiranja slično kromatografiji na agaroznom gelu, gdje čistoća proteina značajno varira pod različitim koncentracijama soli. U praktičnom istraživanju i razvoju i proizvodnji, potrebno je kvantitativno odrediti ravnotežne uvjete eluiranja da bi se dobio ciljni protein visoke -čistoće.

 

4. Tipični slučajevi primjene

• Uklanjanje DNA, virusa i proteina stanice domaćina
• Hvatanje plazmida, virusa i proteina, kao i pročišćavanje oligonukleotida
• Dekolorizacija bujona za fermentaciju kvasca i visok{0}}kapacitet hvatanja proteina

 

5. Operativni postupak / Tijek rada

5.1: Priprema i montaža opreme:

5.1.1: Ugradnja membranskog kromatografskog modula na AKTA kromatografski sustav. Metoda ugradnje slična je kromatografskom mediju s -napunjenim slojem; pazite da smjer protoka slijedi strelicu označenu na modulu. Modul se može spojiti pomoću luer konektora ili steznih konektora.

5.1.2 Postavite ulaznu brzinu protoka na 5–10 MV/min i koristite međuspremnik za ravnotežu za ispuštanje zraka iz modula. Nastavite s ispiranjem sve dok se na izlazu ne uoče mjehurići, zatim spojite izlaz permeata na kromatografski sustav.

5.2.:Priprema-prije uporabe

5.2.1: Postavite ulaznu brzinu protoka na 5-10 MV/min i provedite predtretman korištenjem 0,5 M NaOH za više od 5 MV kako biste osigurali da membrana postigne ravnotežu.

5.2.2: Pod istim uvjetima brzine protoka, izvršite pred-tretman s 1 M NaCl za više od 5 MV kako biste osigurali da membrana postigne ravnotežu.

5.3. Kromatografski postupak

5.3.1 Postavite ulaznu brzinu protoka na 5-10 MV/min i provedite pred-tretman s puferom za ravnotežu za više od 5 MV dok membrana ne postigne ravnotežu.

5.3.2 Nakon pred-filtracije od 0,22 μm, nanesite uzorak na kolonu i nastavite dok se ne nanese cijeli uzorak ili dok se ne postigne kromatografski kapacitet punjenja.

5.3.3 Isperite puferom za ravnotežu više od 10 MV dok se UV vrijednost ne smanji na osnovnu vrijednost.

5.3.4 U skladu s dizajnom procesa, primijenite gradijentnu eluciju ili linearni sustav elucije i prema potrebi sakupite frakcije u segmentima.

5.4 CIP tretman nakon-uporabe – CIP (Clean{2}}in-Place) za sustav membranske kromatografije.

5.4.1 Postavite ulazni protok na 5–10 MV/min i tretirajte s 1 M NaOH više od 10 MV dok UV vrijednost ne padne ispod osnovne linije.

5.4.2 Nakon 30 minuta cirkulirajućeg pranja, isperite vodom dok pH ne bude između 7 i 8, zatim prijeđite na 20% etanol i nastavite s čišćenjem dok vodljivost ne ostane gotovo nepromijenjena.

5.5 Skladištenje membranske kromatografije

Nakon upotrebe i završetka CIP-a, membranski modul se može ukloniti i pohraniti namakanjem u 20% etanola ili pohraniti online na sobnoj temperaturi u otopini koja sadrži 20% etanola. Otopinu 20% etanola treba redovito pregledavati i mijenjati.

 

6, Podaci o narudžbi

Kapsulni filtar za kromatografiju sa slabom kationskom izmjenjivačkom membranom tipa CM-

	Laboratorijska vaga	Mala ljestvica	Pilot skala	Razmjer proizvodnje
Model	IEXCM0002ES	IEXCM0050ES	IEXCM0400ES	IEXCM5000ES
Područje membrane	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Popularni tagovi: sp jaka kationska izmjenjivačka membranska kromatografija, Kina, dobavljači, proizvođači, tvornica, veleprodaja, rasuto, na zalihama, besplatni uzorak