Učinkovit i jeftin postupak za bistrenje i ultrafiltraciju kvasca koji eksprimira rekombinantne proteine
Ekspresija egzogenih gena kvasca ne samo da može proizvesti rekombinantne proteine i peptide, antitijela i cjepiva, citokine, faktore rasta, hormone i druge bioaktivne tvari, već se također može koristiti za proizvodnju industrijskih enzima, funkcionalne hrane i bioloških materijala, što ima široke izglede za primjenu .
Sustav ekspresije kvasca uključuje dva uobičajeno korištena sustava ekspresije, to jest sustav ekspresije Saccharomyces cerevisiae i sustav ekspresije metanotrofnog kvasca. Sustav ekspresije kvasca s metanolom trenutačno je najčešće korišten sustav ekspresije kvasca, a Pichia je najčešće korišten, koji može koristiti metanol kao ugljik i energiju. Osim toga, tu su i Hansenov kvasac, Sphaeroides i tako dalje.
Bez obzira na vrstu sustava ekspresije kvasca, njegovi nizvodni procesi odvajanja i pročišćavanja su slični, a specifični tijek procesa uzima ekspresiju rekombinantnih proteina i polipeptidnih lijekova u kvascu kao primjer.
Guidling mikrofiltracijske membranske kasete usvajaju otvoreni kanal protoka i način filtracije tangencijalnog protoka, koji može učinkovito obraditi složenu tekućinu za punjenje kao što je tekućina za fermentaciju kvasca i tekućina za krekiranje E. coli velikom brzinom, i može osigurati linearno pojačanje od malih testnih do proizvodnih razmjera. Kompaktan modularni dizajn, jednostavno povezivanje cjevovoda, neovisnost i čitljivost sustava mogu zaštititi operatere i spriječiti biološko zagađenje. I nema provjere održavanja i čišćenja. Stoga je vrlo prikladan za korak bistrenja rane daljnje obrade.
Glavna svrha UF/DF procesa je uklanjanje nečistoća i istiskivanje pufera. Guidling ultrafiltracijska membranska kazeta ima dobru homogenost veličine pora membrane i snažnu hidrofilnost, što može dati membrani veći protok i manju adsorpciju proteina, te optimiziran dizajn kanala protoka, s manjim padom tlaka, lakim prijenosom materijala i značajno skraćivanjem vremena filtracije. Štoviše, serija proizvoda je potpuna i fleksibilna kako bi zadovoljila potrebe raznih aplikacija različitih razmjera. Stoga je vrlo prikladan za UF/DF korak nizvodne obrade.
Slijedi primjer primjene Guidlingove membranekasetau kvascima ekspresija rekombinantnih proteina.
Bistrenje mikrofiltracijom
Koristili smo {{0}}.11 četvornih metara membranske kazete s porama od 0,22 μm za bistrenje 1,5 L tekućine fermentacije kvasca (ciljana molekularna težina proteina 42-55 KD) mikrofiltracijom. U cijelom procesu mikrofiltracije, ispitivana je stopa oporavka ciljnog proteina, promjena zamućenja i smanjenje protoka kroz membranu.
0-17min je proces koncentracije, 17-32min je proces ispiranja i filtracije. Tijekom cijelog procesa mikrofiltracije, TMP je postupno rastao, ulazna brzina tekućine ostala je nepromijenjena, a prosječni tok materijala bio je 45 LMH.
Zamućenost tekućine bila je 600NTU prije mikrofiltracije i 8NTU nakon mikrofiltracije, a zamućenost se očito promijenila.
Rezultati su pokazali da je prinos ciljnog proteina > 90%. Membranska kazeta Guidling Technology 0,22μm stabilna je i prikladna za ovaj scenarij primjene.
Ultrafiltracijska koncentracija
Koncentracija ultrafiltracije 1,5 L pročišćene tekućine (ciljana molekulska težina proteina 42-55kd) izvedena je korištenjem 0.11 četvornih metara membranske kazete od 10 kd. U cijelom procesu ultrafiltracije ispitana je stopa oporavka ciljnog proteina, smanjenje protoka kroz membranu i stopa oporavka protoka vode.
Prije i nakon uporabe, stopa oporavka membrane može doseći 90%.
0-15min je proces koncentracije, 15-18min je proces izmjene tekućine. Tijekom cijelog procesa ultrafiltracije, TMP se postupno povećavao, ulazna brzina tekućine ostala je nepromijenjena, a prosječni tok materijala bio je 50 LMH.
Rezultati su pokazali da je ciljni protein potpuno zarobljen. Guidling Technology 10kd membranske kasete mogu raditi stabilno i prikladne su za ovaj scenarij primjene.
Većina rekombinantnih proteina koje je eksprimirao kvasac nije bila visoko eksprimirana. Zamućenost filtrirane tekućine očito je smanjena, a stopa obnavljanja proteina veća. Budući da je naknadno kromatografsko vrijeme predugo, uzrokovat će štetne učinke na protein, kako bi se skratilo kromatografsko vrijeme uzorkovanja, može se dodati jedan korak koncentracije ultrafiltracije, a ciljani protein može se koncentrirati brzo nakon uzorka, što može postići svrhu uštede vremena, smanjenje volumena punila i time smanjenje troškova proizvodnje.
Kazete s mikrofiltracijskom membranom Guidling Technology općenito mogu smanjiti zamućenost dovodne tekućine na manje od 20 NTU, u potpunosti zadovoljavajući potrebe naknadne ultrafiltracije i kromatografije. Stopa oporavka ultrafiltracije kazeta s ultrafiltracijskom membranom varirat će zbog različitih materijala, opća stopa oporavka može doseći 90-95%.
Guidling Technology poziva vas da zatražite testne setove za odgovarajuću procjenu.
O Guidlingu
Guidling Technology je nacionalno visokotehnološko poduzeće koje se fokusira na biofarmaceutike, kulturu stanica, pročišćavanje i koncentraciju biomedicine, dijagnozu i industrijske tekućine. Uspješno smo razvili centrifugalne filtarske uređaje, kazete za ultrafiltraciju i mikrofiltraciju, filtar za viruse, TFF sustav, dubinski filtar, šuplja vlakna itd. koji u potpunosti zadovoljavaju scenarije primjene biofarmaceutike, stanične kulture itd. Naše membrane i membranski filtri naširoko se koriste u koncentraciji, ekstrakciji i odvajanju predfiltracije, mikrofiltracije, ultrafiltracije i nanofiltracije. Naše brojne linije proizvoda, od male laboratorijske filtracije za jednokratnu upotrebu do proizvodnih filtracijskih sustava, ispitivanja sterilnosti, fermentacije, kulture stanica i više, zadovoljavaju potrebe testiranja i proizvodnje. Guidling Technology veseli se suradnji s vama!
